皮诺飞生物大鼠皮肤损伤模型服务的定义和实验方法的介绍：

一、 定义

大鼠皮肤损伤模型服务是指通过特定的物理、化学、手术或疾病叠加方法，在健康或病理状态大鼠的皮肤上制造可控的创伤（如创口、溃疡、烧伤、缺血性损伤等），用于模拟人类皮肤损伤修复过程或特定难愈性皮肤病理状态（如慢性溃疡、增生性瘢痕、糖尿病足）的科学研究服务。该模型主要用于研究创伤愈合的细胞与分子机制、评估促进愈合或抑制异常修复（如瘢痕、挛缩）的药物、生物材料或治疗策略的有效性。

二、 实验方法

根据损伤类型、深度和研究目的，常用的大鼠皮肤损伤模型建立方法包括：

1.  全层皮肤切除/切割伤模型 (Full-Thickness Excisional/Incisional Wound Model):

原理： 移除或切开皮肤全层（表皮、真皮及皮下组织），形成开放创面（切除伤）或闭合切口（切割伤），模拟手术创伤、深度撕裂伤或溃疡清创。

操作：

选择成年大鼠（常用品系：Sprague-Dawley (SD), Wistar，雌雄依研究需求而定）。

麻醉大鼠，剃除背部目标区域毛发（避开肩胛骨），彻底消毒皮肤。

切除伤 (Excisional - 更常用):

使用皮肤活检打孔器（常用直径：8-12 mm，大鼠体型大于小鼠）或手术剪/刀，在背部中线两侧对称位置（避免动物舔舐干扰）精确切除圆形或方形的全层皮肤（穿透真皮至皮下筋膜层）。

创面通常暴露（研究自然愈合动力学）或用特定敷料/装置（如硅胶环、腔室）覆盖固定（研究敷料/药物效果）。

切割伤 (Incisional):

使用手术刀片做一条或多条平行直线切口（长度通常2-4 cm），深度穿透真皮全层至皮下组织。

切口通常用缝合线（如4-0尼龙线）进行间断或连续缝合闭合，模拟临床手术切口。

对照组： 同品系同条件大鼠接受相同操作，或设置不同处理组进行对比。

2.  部分厚度皮肤损伤模型 (Partial-Thickness Wound Model):

原理： 破坏表皮和部分真皮（保留深部真皮附件和部分真皮网状层），模拟浅Ⅱ度烧伤、擦伤或表皮剥脱伤。

操作：

准备同上（麻醉、剃毛、消毒）。

热烫伤法 (模拟烫伤)：

使用预热的金属棒（黄铜或不锈钢，常用直径：1.5-2.5 cm）或专业烫伤仪。

将金属棒以预设温度（如80-95℃，根据目标深度调整）和恒定压力，垂直接触剃毛皮肤预设时间（如10-25秒）。关键： 温度、压力、时间需精确控制且可重复。

移除热源后，立即用室温生理盐水冷却创面。

金刚砂纸/剃刀刮除法：

使用粗糙的金刚砂纸（如P80-P120）或锋利手术刀片，在恒定力度和方向下反复刮削目标皮肤区域，直至出现均匀点状出血（暴露真皮乳头层）。需通过组织学确认深度一致性。

3.  热烧伤模型 (Thermal Burn Model - 通常为深Ⅱ度或Ⅲ度):

原理： 利用高温造成皮肤全层凝固性坏死，模拟严重烧伤。

操作：

准备同上。

接触烫伤法（最常用且较标准）：

使用预热的黄铜棒（常用组合：100℃接触10秒或90℃接触20秒，可造成深Ⅱ度至Ⅲ度烧伤）或定制烧伤模板。

将金属棒垂直、均匀压在剃毛皮肤上预设时间。

热水法：

设计特定形状的开口腔室紧贴皮肤，注入设定温度（如95-98℃）的热水预设时间（如10-15秒）。

移除热源/热水后，立即用室温生理盐水冷却创面。坏死焦痂通常保留以观察自然脱落和愈合过程，或按研究设计进行早期切痂。

4.  缺血性皮瓣模型 (Ischemic Flap Model):

原理： 通过手术形成带蒂皮瓣，并部分或完全阻断其血供，模拟皮瓣移植术后缺血、压疮或血管病变导致的组织坏死和愈合障碍。

操作：

准备同上。

背部超长随机皮瓣法（最常用）：

设计一个基于背中线头侧的矩形皮瓣（常用尺寸：长宽比 >3:1，如3 cm x 10 cm）。

沿设计线切开皮肤全层至深筋膜下，将皮瓣从筋膜下层完全掀起。

关键点： 仅保留皮瓣近端（头侧）约1 cm宽度的皮下组织及可能存在的穿支血管作为蒂部供血，其余三边及远端完全游离。

将掀起的皮瓣原位缝合回创面床。

皮瓣远端因蒂部供血不足会形成明确的缺血坏死区（约40-60%皮瓣长度）。

5.  慢性难愈创面模型 (Chronic Wound Model):

原理： 在基础创面（通常为全层切除伤）上叠加干扰正常愈合的因素，模拟糖尿病足溃疡、静脉溃疡、压疮等迁延不愈的创面。

操作：

糖尿病叠加创面法（最经典有效）：

诱导糖尿病状态：

化学诱导法： 腹腔注射链脲佐菌素（STZ，常用剂量：50-65 mg/kg，溶于柠檬酸缓冲液），连续数天或单次高剂量注射。稳定高血糖（血糖>300 mg/dL）后1-2周制作创面。

遗传模型： 使用Zucker糖尿病肥胖（ZDF）大鼠或GK大鼠等自发性II型糖尿病品系。

在糖尿病大鼠背部制作全层皮肤切除伤（直径8-10 mm）。与非糖尿病大鼠相比，愈合显著延迟（常>21天）。

缺血叠加创面法：

在制作全层切除伤前，结扎创面周围的主要营养血管（如腰动脉分支）或在创面下制造缺血带（如硅胶环压迫）。

感染叠加创面法：

在全层切除伤创面床接种特定病原菌（如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA，铜绿假单胞菌），建立持续性生物膜感染。

反复损伤/延迟愈合法：

对正在愈合的创面（如切除伤）进行周期性、可控的再损伤（如无菌器械刮除新生上皮/肉芽、施加机械压力）。

(模型验证说明： 建模后需通过创面面积测量（愈合率计算）、大体观察（肉芽颜色/质地、上皮爬行、坏死范围、感染迹象）、组织病理学检查（H&E染色评估再上皮化、肉芽组织成熟度、炎症、胶原排列；Masson染色评估胶原；CD31/PAS染色评估血管新生/基底膜；特殊染色检测细菌/真菌）等确认模型成功建立和愈合状态。此部分为验证环节，非实验方法本身)。