皮诺飞生物小鼠肝转移瘤（脾转肝）药效评估服务的定义和实验方法的介绍：
一、 定义
小鼠肝转移瘤（脾转肝）模型服务是指通过脾脏注射肿瘤细胞，模拟肿瘤细胞经门静脉循环向肝脏定向转移的病理过程，建立高临床相关性肝转移灶模型，用于评价药物抑制肝定植、控制微转移灶及延长生存期的有效性。该模型聚焦肝癌转移的关键路径（门静脉播散），是评估抗肝转移药物的金标准平台。
1. 模型构建原理
- 病理模拟：
脾脏注射的肿瘤细胞经脾静脉→门静脉→肝脏，复现结直肠癌/胰腺癌肝转移的解剖路径（非直接肝注射干扰微环境）。
- 优势：
- 自发形成多灶性肝转移（>90%成模率）
- 保留肿瘤细胞外渗、定植、血管生成全过程
2. 标准化操作流程
实验操作步骤表
步骤
| 操作细节 |
动物选择
| BALB/c nude（人源细胞）或C57BL/6（鼠源细胞），雌性，6-8周龄 |
细胞准备
| 荧光素酶标记高转移细胞（如CT26-Luc、HCT116-Luc），浓度 2×10⁵/50μL PBS |
脾脏注射
| 1. 麻醉小鼠，左腹切口暴露脾脏 |
对照组设置
| 假手术组（注射PBS）、溶剂对照组、阳性药组（5-FU 30mg/kg或瑞戈非尼10mg/kg） |
术后管理
| 镇痛（布托啡诺，1mg/kg），监测切口感染 |
> 注：注射后5-7天IVIS活体成像验证肝转移灶形成（光子信号＞1×10⁴ p/s/cm²/sr）。
3. 药效评价方案
（1）分组与给药
干预策略与时间窗表
组别
| 干预策略
| 时间窗 |
预防组
| 接种前3天启动治疗
| 阻断早期定植 |
治疗组
| 接种后7天（转移灶可见）启动
| 模拟临床干预 |
给药途径
| 口服（PO）、腹腔注射（IP）、静脉注射（IV）
| q.d./q.o.d.×21天 |
（2）核心评价指标
检测模块关键数据表
检测模块
| 方法
| 关键数据 |
转移负荷监测
| 活体成像（IVIS）
| 肝区光子通量变化率（ΔFL=FLₜ/FL₀） |
离体验证
| 肝组织离体成像+H&E染色
| 转移灶数量/最大直径（ImageJ量化） |
分子病理
| 肝转移灶IHC染色
| Ki67（增殖）、CD31（微血管密度）、CXCR4（趋化因子） |
生存分析
| Kaplan-Meier曲线
| 中位生存期（MS）及延长率 |
（3）肝功能与毒性监控
- 血清学：ALT/AST（肝损伤）、ALP（胆管阻塞）
- 全身毒性：体重曲线、血常规（中性粒细胞计数）
4. 高级分析模块
（1）转移微环境解析
```mermaid
graph TB
A[肝单细胞悬液] --> B[流式细胞术]
B --> C1[免疫抑制细胞： Tregs（CD4⁺FoxP3⁺）/ MDSCs（CD11b⁺Gr1⁺）]
B --> C2[基质细胞： 肝星状细胞（GFAP⁺）/ Kupffer细胞（F4/80⁺）]
B --> C3[肿瘤干细胞： CD133⁺EpCAM⁺]
```
（2）靶向递送系统评价
- 肝靶向纳米颗粒载药：
- 比较游离药 vs 载药组肝转移灶药物浓度（LC-MS/MS）
- 共聚焦显微镜观察纳米颗粒在转移灶分布
三、 模型特色与验证
特色技术保障表
特色
| 技术保障 |
高成模率
| CT26模型接种后14天肝转移发生率>95%（H&E验证） |
多癌种适配
| 支持结直肠癌（CT26）、胰腺癌（PAN02）、胃癌（MFC）细胞系 |
PDX模型
| 患者来源转移性肿瘤组织→脾脏移植（NSG小鼠），保留原始突变谱 |
耐药模型
| 5-FU预处理筛选CT26耐药株，评价逆转转移耐药效果 |
四、 服务流程
```mermaid
graph LR
A[肿瘤细胞标记/PDX组织处理] --> B[小鼠脾脏注射]
B --> C[活体成像验证转移]
C --> D[分组给药]
D --> E[动态监测肝转移负荷]
E --> F[终末肝组织多维度分析]
F --> G[数据报告]
```
交付成果：
- 肝转移动态生长曲线（IVIS光子值）
- 离体肝转移灶分布热图
- IHC分子病理全景图（Ki67/CD31/CXCR4）
- 流式微环境细胞组分统计表
- 生存分析报告（HR值及p值）
> 注：
> - 符合GLP规范（实验记录SOP编号：GLP-ONC-2025-SP01）
> - 提供转移灶分级标准（Ⅰ级：≤5灶；Ⅱ级：6-15灶；Ⅲ级：>15灶或融合灶）
> - 伦理批准号：IACUC-2025-HM02
核心价值：
抗肝转移药物高通量筛选｜ 靶向递药系统肝蓄积评价｜️ 免疫疗法抑制转移机制研究｜转化医学研究支持
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