服务介绍：

免疫荧光六标即利用酪胺信号放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技术，在同一张切片上对六种蛋白同时进行标记，从而可实现对多种蛋白空间定位，定性及半定量分析。

TSA技术主要原理为荧光标记的酪胺在二抗上偶联的HRP与H₂O₂的作用下变为活化的酪胺并附着在靶标周围的蛋白酪氨酸残基上，此结合是共价结合。而一抗与靶标、二抗与一抗之间是非共价结合。通过抗体洗脱液处理，非共价结合的一抗二抗被洗脱掉，而共价结合的荧光酪胺依然附着在靶标周围，将靶标通过荧光标记显示出来。在检测第二个靶标时，相当于全新的一轮标记，无需考虑第二轮的抗体是否与第一轮的抗体产生交叉反应。只需改变不同种类荧光染料标记TSA即可实现多个靶标的标记。通过多次重复免疫标记，使用不同的荧光酪胺实现双重或多重荧光染色。

结果展示：

免疫荧光六标七色

送样运输要求：

1、石蜡切片常温保存运输，冰冻切片﹣20℃保存运输

2、细胞爬片PFA固定15min后用无菌PBS洗涤，无菌PBS浸泡，4℃冰袋保存运输到实验室

实验大体流程：

石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育第一种一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF440-TSA——抗体洗脱——血清封闭——孵育第二种一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——抗体洗脱——血清封闭——孵育第三种一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF546-TSA——抗体洗脱——血清封闭——孵育第四种一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF594-TSA——抗体洗脱——血清封闭——孵育第五种一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——抗体洗脱——血清封闭——孵育第六种一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF750-TSA——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。

（TSA荧光染料的搭配及加样顺序根据各抗体的表达情况来确定。）

仅供科研用途，不可用于临床诊断！