皮诺飞生物小鼠肝原位瘤模型服务的定义和实验方法的介绍：
小鼠肝原位瘤模型服务是指通过外科手术或影像引导将肿瘤细胞/组织精准移植至小鼠肝脏实质内，模拟原发性肝癌或转移性肝肿瘤的病理微环境（肝窦结构、Kupffer细胞、星状细胞互作），用于靶向药物疗效评价、免疫疗法机制研究及转移干预策略开发的临床前平台。该模型最大程度保留肝脏特异性代谢与免疫特征，是肝癌药物研发的金标准体内模型。
二、 实验方法
1. 模型构建核心步骤
实验操作标准化参数表
参数
| 标准化操作 |
动物选择
| - 免疫缺陷鼠（NSG/BALB/c nude）：人源肝癌细胞（HepG2、Huh-7）或PDX移植
- 免疫健全鼠（C57BL/6）：鼠源细胞（Hepa1-6、RIL-175）或DEN诱导原发肝癌 |
手术造模
| 开腹肝包膜下注射法（经典方法）：
1. 麻醉小鼠，腹中线切口暴露肝左叶
2. 显微注射 1×10⁵–5×10⁵个荧光素酶标记细胞（30μL PBS+50% Matrigel®）至肝包膜下
3. 明胶海绵压迫止血，分层缝合腹腔
替代方案：超声引导经皮穿刺注射（减少手术损伤） |
细胞/组织类型
| - 细胞系：悬浮注射（高侵袭株优先，如MHCC97H）
- PDX组织：1-2mm³患者肿瘤碎片（套管针植入） |
对照组设置
| 假手术组（注射基质胶）、溶剂对照组、阳性药组（索拉非尼30mg/kg或仑伐替尼10mg/kg） |
术后管理
| 镇痛（布托啡诺1mg/kg）、保温复苏，监测切口感染（>95%存活率） |
实验操作标准化参数表
参数
| 标准化操作 |
动物选择
| - 免疫缺陷鼠（NSG/BALB/c nude）：人源肝癌细胞（HepG2、Huh-7）或PDX移植 |
手术造模
| 开腹肝包膜下注射法（经典方法）： |
细胞/组织类型
| - 细胞系：悬浮注射（高侵袭株优先，如MHCC97H） |
对照组设置
| 假手术组（注射基质胶）、溶剂对照组、阳性药组（索拉非尼30mg/kg或仑伐替尼10mg/kg） |
术后管理
| 镇痛（布托啡诺1mg/kg）、保温复苏，监测切口感染（>95%存活率） |
> 注：术后7天IVIS成像验证成瘤（肝区光子信号＞1×10⁴ p/s/cm²/sr），剔除信号扩散个体。
2. 药效评价体系
（1）肿瘤生长监测
肿瘤检测技术与指标表
技术
| 检测指标
| 优势 |
活体成像(IVIS)
| 肝区光子通量动态变化（ΔFL=FLₜ/FL₀）
| 无创定量肿瘤活性 |
高频超声(40MHz)
| 肿瘤三维体积（V=π/6×L×W×H）、坏死区占比
| 实时评估内部结构 |
终末瘤重
| 肝称重后分离瘤组织，计算抑瘤率 TGI(%)=[1-(治疗组瘤重/对照组瘤重)]×100%
| 直接反映肿瘤负荷 |
（2）转移与侵袭评价
- 门静脉侵袭：H&E染色评估脉管癌栓（分级：0级无；1级微浸润；2级肉眼可见）
- 远处转移：离体肺/骨/脑成像+病理验证（H&E染色计数微转移灶）
（3）肝功能与分子病理
临床检测模块与指标表
检测模块
| 靶标/指标
| 临床意义 |
血清生化
| ALT/AST（肝损伤）、ALP（胆管阻塞）、AFP（肝癌标志物）
| 药物肝毒性/疗效监控 |
免疫组化(IHC)
| Ki67（增殖）、CD34（微血管密度）、GS（癌旁肝代谢）
| 血管新生与代谢重编程 |
多色免疫荧光
| PD-L1⁺肿瘤细胞/CD8⁺T细胞空间分布
| 免疫检查点微环境 |
流式细胞术
| Kupffer细胞（F4/80⁺）、MDSCs（CD11b⁺Gr1⁺）
| 肝特异性免疫抑制微环境解析 |
3. 特色模型扩展
肿瘤模型应用场景与技术要点表
模型类型
| 应用场景
| 技术要点 |
PDX肝癌模型
| 保留患者肿瘤异质性与突变谱
| NSG小鼠移植，提供基因组验证报告 |
转移性模型
| 自发性肺转移评价
| 高转移细胞系（如HCCLM3）肝内接种 |
免疫人源化模型
| 免疫疗法评价
| NSG-SGM3小鼠+人CD34⁺造血干细胞重建 |
耐药模型
| 靶向药耐药机制研究
| 索拉非尼压力筛选HepG2耐药株 |
四、 标准化服务流程
```mermaid
graph TB
A[细胞/PDX组织准备] --> B[小鼠肝原位移植]
B --> C[活体成像验证成瘤]
C --> D[随机分组给药]
D --> E[动态监测肿瘤/肝功能]
E --> F[终末取材与多维度分析]
F --> G[数据整合报告]
交付成果：
- 肿瘤生长动力学曲线（IVIS光子值+超声体积）
- 肝病理切片全景图（H&E/IHC，标注脉管侵犯）
- 免疫微环境流式热图（Kupffer/MDSCs/T细胞亚群）
- 药效统计表：
临床试验数据表
组别
| TGI(%)
| 肺转移抑制率(%)
| 中位生存期(天)
| AFP下降率(%) |
对照组
| -
| -
| 35
| - |
治疗组
| 68.5
| 79.2
| 52
| 63.4 |
(p<0.05, p<0.01 vs 对照组)
> 注：
> - 质量控制：假手术组无肿瘤信号，溶剂对照组成瘤率≥90%
> - 伦理合规：AAALAC认证（协议号：IACUC-2025-LI02），支持FDA/IND申报
> - 周期：基础实验28天，PDX模型延长至8周
核心价值：
肝癌靶向药物敏感谱构建｜免疫联合方案优化｜抗癌转移药物筛选｜肝靶向递药系统评价
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