蛋白鉴定

乙酰化蛋白质组学

服务介绍:

  蛋白质组学(Proteomics)指的是大规模、高通量地研究一个细胞、组织或物种中表达的全套蛋白质的学科。近十年来,质谱技术的飞速发展大大推动了的蛋白质组学的进步,基于质谱的蛋白质组学已经成为蛋白质研究领域必不可少的技术手段。通过蛋白质组学技术可以对生物样本中的蛋白质、翻译后修饰位点(如磷酸化)进行大规模地鉴定或定量,进而从高通量的数据分析中挖掘有价值的信息和规律,为功能机制的探究提供线索和基础。2003年,人类基因组计划(HGP)完成精细图的绘制后,同年,人类蛋白质组学计划(HPP)随即开展起来,反映了科研领域对蛋白质组学的重视。经过十年时间,多家单位的共同努力下,人类蛋白质组草图也于2014年在Nature杂志公布了。

  蛋白质的乙酰化修饰是在乙酰基转移酶的作用下,蛋白质的赖氨酸残基上添加乙酰基的过程,是细胞控制基因表达、蛋白质的活性或生理过程的一种机制。乙酰化主要集中在对细胞染色体结构的影响以及对核内转录调控因子的激活方面,还参与细胞周期和新陈代谢、肌动蛋白聚合控制。乙酰化蛋白质组以组织、细胞等较为复杂样本为研究对象,目的在于鉴定样品中发生乙酰化的蛋白质以及相应的乙酰化位点。

  1. 乙酰化修饰普遍存在于人体的代谢酶之中,具有调节代谢通路及代谢酶的活性。

  2. 乙酰化对代谢的调控在生命进化过程中极为保守,广泛存在于从低等原核细胞到包括人在内的高等哺乳动物的翻译后修饰过程中。

  3. 蛋白质的乙酰化具有很高的功能特异性,与肿瘤等等疾病密切相关,这为开发代谢类疾病的药物研发提供了重要依据和全新思路。

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乙酰化蛋白质组学面议

  实验结果展示:

  1 乙酰化蛋白组一般流程图


  2、样品中蛋白鉴定结果概览



  实验流程:

  蛋白提取—蛋白酶解—乙酰化肽段富集—RP分离-高分辨质谱检测采集数据—数据库检索—数据分析-定性定量蛋白质结果-统计学,生物信息学分析


  送样运输要求:

  1、蛋白样本

  ①蛋白量大于100ug,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②建议测定蛋白浓度后,液氮速冻,避免蛋白降解,另外需要告知蛋白溶液的缓冲液成分和浓度,方便实验室收到后进行后续处理。

  ③胶条、胶点样本不建议进行定量蛋白质组学。

  2、细胞样本

  ①细胞量1x107个,收集细胞沉淀,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②收集时,用预冷PBS缓冲液清洗三次,去除培养基成分,然后离心去除上清保存。

  3、血清样本

  ①样本量500uL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②样本应尽量避免溶血。

  4、血浆样本

  ①样本量500uL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②样本应尽量避免溶血。

  5、尿液样本

  ①样本量2mL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②样品应尽量避免带入粪便残渣。

  6、动物组织样本

  ①样本量300mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②收集时,用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液,并用滤纸吸干多余水分,避免冻存时结冰。

  ③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

  7、植物组织样本

  ①样本量500mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②收集时,用预冷PBS缓冲液冲洗表面泥沙,并用滤纸吸干多余水分,避免冻存时结冰。

  ③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

  8、微生物样本

  ①样本量干重200mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  ②收集时,用预冷PBS缓冲液清洗三次,去除培养基成分,然后离心去除上清保存。


仅供科研用途,不可用于临床诊断!