服务介绍：

　　蛋白质组学(Proteomics)指的是大规模、高通量地研究一个细胞、组织或物种中表达的全套蛋白质的学科。近十年来，质谱技术的飞速发展大大推动了的蛋白质组学的进步，基于质谱的蛋白质组学已经成为蛋白质研究领域必不可少的技术手段。通过蛋白质组学技术可以对生物样本中的蛋白质、翻译后修饰位点(如磷酸化)进行大规模地鉴定或定量，进而从高通量的数据分析中挖掘有价值的信息和规律，为功能机制的探究提供线索和基础。2003年，人类基因组计划(HGP)完成精细图的绘制后，同年，人类蛋白质组学计划(HPP)随即开展起来，反映了科研领域对蛋白质组学的重视。经过十年时间，多家单位的共同努力下，人类蛋白质组草图也于2014年在Nature杂志公布了。

　　SWATH/DIA是一项区别于DDA采集的全新的、全息式的质谱技术，将扫描范围划分为以25 Dalt为间隔的一系列区间，通过超高速扫描来获得扫描范围内全部离子的所有碎片信息，是 MS/MS ALL技术的扩展。SWATH/DIA采用数据非依赖性的扫描采集模式，将扫描区间内所有的肽段母离子经过超高速扫描并进行二级碎裂，使用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量，从而获得完整的肽段信息。DIA/SWATH技术是一种真正全景式、高通量的质谱技术，同时也大大提高了定量的可重现性。

　　蛋白质磷酸化是生物体中最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式，它可以通过激发、调节诸多信号通路进而参与调控生物体的生长、发育、逆境应激、疾病发生等多种生命过程，所以磷酸化一直是生物学研究的重点与热点。磷酸化蛋白质组(Phosphoproteomics)以组织、细胞等较为复杂样本为研究对象，目的在于鉴定样品中发生磷酸化的蛋白质以及相应的磷酸化位点。

　　将磷酸化肽段富集技术与SWATH技术相结合，实现对磷酸化蛋白质组定性、定量的研究。

　　实验结果展示：

　　图1 磷酸化蛋白组一般流程思路

　　实验流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—磷酸化肽段富集—DIA方式采集数据—数据库检索—数据分析

　　送样运输要求：

　　1、蛋白样本

　　①蛋白量大于100ug，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②建议测定蛋白浓度后，液氮速冻，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的缓冲液成分和浓度，方便实验室收到后进行后续处理。

　　③胶条、胶点样本不建议进行定量蛋白质组学。

　　2、细胞样本

　　①细胞量1x10⁷个，收集细胞沉淀，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

　　3、血清样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　4、血浆样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　5、尿液样本

　　①样本量2mL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样品应尽量避免带入粪便残渣。

　　6、动物组织样本

　　①样本量300mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　7、植物组织样本

　　①样本量500mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面泥沙，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　8、微生物样本

　　①样本量干重200mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！