实验原理

荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪(化学发光仪)测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。双荧光素酶体系，即有两种荧光素酶，比较常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素，而海肾荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。以其中一个作为内参对照，即表达量基本恒定，用于减少试验中不同处理间所固有的变化，包括培养细胞的数目及活力的差异，细胞转染及裂解的效率，而另外一个荧光素酶则作为报告基因，用于指示不同处理条件下基因的表达情况。

实验应用

潜在启动子/启动子核心区域检测；潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测；

启动子区可能的转录因子结合位点检测；启动子/增强子与转录因子的相互作用；

病毒/细胞相互作用；药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强);

射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强);microRNA靶基因验证。

以双荧光素酶实验进行microRNA靶基因验证为例，介绍相关的实验流程。

结果展示

pGL3-Basic Vector为骨架插入目的基因5'-UTR序列

荧光素酶质粒构建