细胞分板实验介绍  

细胞分板是细胞实验中的基础核心技术，旨在将消化处理后的单细胞悬液均匀分配至培养板（如6孔板、24孔板、96孔板等）各孔中，为后续药物筛选、增殖检测、毒性分析等高通量实验提供标准化细胞样本。理想的分板需确保孔间一致性（细胞数量、活性、分布均匀），避免因局部过密或过疏导致实验偏差。  

适用场景包括：  

- 药物筛选：96孔板梯度浓度药效测试  

- 细胞功能研究：如凋亡检测、转染效率分析  

- 高通量检测：MTT/MTS、荧光成像等  

实验流程  

1. 单细胞悬液制备  

- 消化处理：弃原培养基→PBS清洗→胰酶消化（时间依细胞类型调整，镜检至细胞变圆脱落）  

- 离心重悬：800-1000rpm离心5min→弃上清→加培养基轻柔吹打至无团块单细胞态  

2. 细胞计数与稀释  

- 血球计数板法：计算悬液密度（公式：细胞数/ml = (4大格总数/4)×10⁴×稀释倍数）  

- 梯度稀释：按目标接种量（如96孔板常为5×10³~1×10⁴/孔）调整浓度  

3. 接种与摇匀  

- 低张力加液法：  

  - 每孔预铺少量培养基润底→沿孔壁左侧缓慢注入细胞悬液  

  - 十字摇匀法：水平面“十”字轨迹平移5~6次（避免旋转摇动导致中央聚集）  

  - 轻拍法（适用多孔板）：封闭板盖→水平拍击右侧/前侧各10次促均匀分布  

- 静置贴壁：工作台静置10min→移入37℃ CO₂培养箱  

送样要求  

为确保分板质量，请提供以下信息及样本：  

1. 细胞样本：  

   - 活细胞≥1×10⁶，活性>90%（附活性检测报告）  

   - 运输方式：T25瓶贴壁培养（推荐）或冻存管（需复苏验证）  

2. 培养条件：  

   - 培养基配方、血清浓度、添加剂种类  

   - 贴壁/悬浮类型、消化酶种类及耐受时间  

3. 分板参数：  

   - 培养板类型（孔数、材质）  

   - 目标接种密度/孔（参考下表）  

培养板规格与推荐接种密度对照表  

| 培养板类型 | 每孔培养面积 (cm²) | 建议接种密度 (cells/孔) | 培养基体积 (μL) |  

| 96孔板     | 0.3                 | 1×10³ ~ 1×10⁴           | 100~200        |  

| 24孔板     | 2.0                 | 5×10⁴ ~ 2×10⁵           | 500~1000       |  

| 12孔板     | 3.8                 | 1×10⁵ ~ 5×10⁵           | 1~2 mL         |  

| 6孔板      | 9.6                 | 2×10⁵ ~ 1×10⁶           | 2~3 mL         |  

注意事项  

关键操作要点  

- 消化控制：过度消化损伤活性，不足则致团块。新细胞系需预实验优化时间  

- 摇匀技巧：轻拍法力度需适中（培养基晃动但不溅洒），显微镜下验证均匀性后静置  

- 边缘效应：96孔板外围孔易蒸发，建议外周孔加PBS缓冲，仅用中央60孔接细胞  

环境与质控  

- 生物安全柜规范：  

  - 洁净区（耗材）→操作区（试剂）→污染区（废液）分区摆放，避免遮挡进气格栅  

  - 操作时手臂垂直缓入，减少气流扰动  

- 污染预防：  

  - 操作台紫外灭菌30min→风机预运行10min→试剂入柜前表面消毒  

  - 避免培养箱邻近振动源（离心机、涡旋仪）影响贴壁  

特殊需求适配  

- 免疫荧光：可接受周边稍密铺板（便于观察边缘细胞）  

- 高通量分选：需96/384孔板分选时，可联合磁珠分选（如STEMCELL EasySep™）或微流控芯片技术，提升速度与活性  

备注：以上内容基于标准化操作编写，个性化实验（如原代细胞分板、共培养体系）请咨询技术团队定制方案。 

官网：www.pinuofei.com     预约电话：15392937510