皮诺飞生物细胞 MTT 实验服务介绍

皮诺飞生物的细胞 MTT 实验服务，核心用于细胞活力与增殖能力的定量检测。MTT，即 3-(4,5 - 二甲基噻唑 - 2)-2,5 - 二苯基四氮唑溴盐，是一种黄色可溶性染料。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将 MTT 还原为不溶性的蓝紫色甲瓒结晶，而死细胞无此活性；通过溶剂溶解甲瓒结晶后，其吸光度值（490nm 左右）与活细胞数量呈正相关，据此可间接反映细胞活力及增殖状态。该技术操作简便、成本较低，广泛应用于药物毒性评估、细胞增殖抑制剂筛选、细胞应激反应检测等领域，尤其适合大规模样本的快速定量分析。

实验方法

1. 细胞培养与处理：取对数生长期细胞，按 1×10⁴-5×10⁴个 /mL 浓度重悬，以每孔 100μL 接种于 96 孔板，37℃、5% CO₂孵育过夜。次日加入不同浓度的药物或处理因素（如空白对照、溶剂对照、梯度药物组），每组设 3-5 个复孔，继续孵育 24-72 小时（根据实验需求调整孵育时间）。

2. MTT 溶液添加与孵育：孵育结束后，每孔加入 20μL MTT 溶液（5mg/mL，用 PBS 配制），轻轻混匀，37℃避光孵育 4 小时，确保甲瓒结晶充分形成。

3. 甲瓒结晶溶解：小心吸弃孔内上清液（避免触碰孔底结晶），每孔加入 150μL 二甲基亚砜（DMSO），置于摇床上低速振荡 10 分钟，使蓝紫色结晶完全溶解，溶液呈均匀蓝紫色。

4. 吸光度检测：使用酶标仪在 490nm 波长（参考波长可设为 630nm 以校正背景）下测定每孔的吸光度值（OD 值），记录原始数据。

5. 数据计算：以空白对照组（无细胞仅培养基）OD 值校正背景，计算各处理组的细胞活力：细胞活力（%）=（处理组平均 OD 值 - 空白对照组 OD 值）/（溶剂对照组平均 OD 值 - 空白对照组 OD 值）×100%。

实验结果

1. OD 值数据呈现：提供 96 孔板原始 OD 值记录表，包含空白对照、溶剂对照及各处理组（如不同药物浓度组）的 OD 值及标准差。例如，溶剂对照组 OD 值为 0.82±0.05，10μM 药物处理组 OD 值降至 0.35±0.03，20μM 药物处理组 OD 值进一步降至 0.18±0.02，直观反映处理因素对细胞活力的影响。

2. 细胞活力统计与图表：根据 OD 值计算各处理组细胞活力，绘制柱状图或折线图（如药物浓度 - 细胞活力曲线）。例如，溶剂对照组细胞活力设为 100%，5μM、10μM、20μM 药物组细胞活力分别为 68%±4.2%、43%±3.1%、22%±2.5%，经单因素方差分析（ANOVA），各药物组与溶剂对照组差异均具有显著性（P<0.01），且细胞活力随药物浓度升高呈剂量依赖性下降，表明药物对细胞具有毒性抑制作用；若某生长因子处理组细胞活力升至 156%±5.8%（P<0.01），则说明其可促进细胞存活与增殖。

3. 结果报告：为客户提供完整报告，包含原始 OD 值数据、细胞活力计算过程、统计图表（柱状图 / 折线图）、统计学分析结果（均值、标准差、P 值）及结论解读，明确处理因素对细胞活力的影响程度与趋势，为药物半数抑制浓度（IC₅₀）计算、细胞毒性等级判定等后续研究提供可靠数据支撑。