RNA

miRNA引物合成

作者：admin2025-05-27 15:27 热度：52

服务介绍：

miRNA引物设计是针对成熟序列设计的茎环引物，长度大约45bp，可以自身成环。在3’-端序列的反向互补序列引入一段固定的序列形成一个茎环，即为逆转录引物；在序列的5’-端引入一段固定的序列，即为扩增引物的上游序列。

　　实验结果展示：

　　1、引物设计

　　2、引物示例

　　实验流程：

　　设计引物-合成引物

　　使用方法：

miRNA-茎环法-逆转录引物（*****-RT）稀释方法：

1.引物附在离心管内壁上，稀释前请将引物离心数秒使干粉聚集至管底，小心开启管盖，以免引起粉末飞扬造成损失；

2.将所有逆转录引物（-RT，以及U6-A）稀释成100μM：按照管壁上的nmol数加入10倍体积的无酶水（Water Nuclease-Free，Servicebio，货号:G4700）；

3.以上稀释引物各取1μL（-RT，以及U6-A）加入到一个新的无菌无酶离心管，用无酶水补齐到100ul，混合均匀，即为Gene Specific Primer (1 μM)；

逆转录操作步骤（参考）

以SweScript RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (With gDNA Remover)（Servicebio, G3333）为例：

1. 基因组去除：配制基因组去除反应体系(推荐10 μL)：

2. 第一链cDNA合成

(1) 逆转录反应体系配制（推荐20 μL反应体系）：

轻轻混匀并离心；

(2) 逆转录程序设置：

　　送样运输要求：

　　基因名称和种属、或基因ID号、或成熟的RNA序列；成熟的miRNA有3p和5p之分，故需要告知设计3p还是5p，可以参考相关文献。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！