实验介绍

活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）是细胞代谢过程中产生的一系列活性氧簇，包括过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基等。ROS在细胞信号传导和机体防御中起着重要作用，但过量ROS会导致氧化应激，引起DNA、脂质和蛋白质损伤，最终导致细胞死亡或病变。

检测细胞内ROS水平对于理解药物作用的信号通路、疾病机理研究（如癌症、神经退行性疾病、衰老等）以及抗氧化药物筛选具有关键意义。我们的服务通过专业检测设备，为您提供精准、可靠的ROS水平定量分析，为您的科研项目提供坚实的数据支持。

实验方法

我们采用国际通用的荧光探针法进行ROS检测，主要使用DCFHDA（2,7二氯荧光素二乙酸酯）等探针。具体原理如下：

检测原理

DCFHDA本身不具有荧光，且能自由穿过细胞膜进入细胞内

进入细胞后，被细胞内的酯酶水解生成DCFH，DCFH不能通透细胞膜而被困在细胞内

细胞内的活性氧将无荧光的DCFH氧化生成有荧光的DCF

通过检测DCF的荧光强度（激发波长约480 nm，发射波长约525 nm），即可定量分析细胞内ROS水平

实验流程

1.样本准备：客户提供生长状态良好的细胞或我们协助进行细胞培养

2.探针装载：根据实验设计，采用以下方法之一：

原位装载法（适用于贴壁细胞）：去除培养液，加入稀释后的DCFHDA工作液，37℃避光孵育2030分钟

细胞收集后装载（适用于悬浮细胞）：收集细胞，悬浮于DCFHDA工作液中，37℃避光孵育2030分钟

3.刺激处理：根据客户实验设计，使用特定药物或活性氧阳性对照进行处理

4.荧光检测：使用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度

5.数据分析：提供原始数据、分析结果及详细实验报告

我们可以根据客户需求提供全自动生化仪检测服务，实现高通量、标准化的ROS检测。

样本运输方法

为确保样本质量，请严格按照以下要求准备和运输样本：

样本准备

细胞样本：培养细胞需通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管，加入0.5 mL生理盐水或蛋白保护剂

组织样本：新鲜组织不少于100 mg（约绿豆大小），放入液氮或70℃保存

血液样本：以抗凝管保存血样或分离淋巴细胞后加入生理盐水或蛋白保护剂

血清/培养上清：离心去除杂质后取上清

保存与运输

保存条件：

细胞、组织样本：70℃以下保存，避免反复冻融

血清/上清样本：4℃可保存1520天，70℃可长期保存

运输方式：

组织、细胞样本：干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输

活细胞：可直接寄送培养瓶（确保密封，细胞密度约50%，灌满培养液）

血清/上清：加冰袋运输（确保密封不漏）

注意事项

为确保实验结果的准确性和可靠性，请特别注意以下事项：

样本质量要求

请提供生长状态良好的细胞，并准确提供细胞特性、培养条件及相关注意事项

样本应避免细菌污染和反复冻融，以免影响检测结果