皮诺飞生物细胞 ROS 活性氧检测实验服务介绍

核心定位：定量检测细胞内活性氧（ROS）水平，是研究氧化应激机制、评估外界刺激对细胞氧化状态影响的关键技术。

一、技术原理与应用场景

1. 什么是 ROS？

ROS（活性氧）是细胞代谢的天然产物，主要包括：

• 超氧阴离子（O₂⁻）

• 过氧化氢（H₂O₂）

• 羟基自由基（・OH）

关键特性：正常水平下参与信号传导；氧化应激（药物 / 紫外线 / 炎症）时大量积累，可导致 DNA 损伤、蛋白质氧化，引发细胞功能异常。

2. 检测原理

通过 荧光探针与 ROS 特异性反应 实现定量：

• 探针进入细胞后，与 ROS 发生氧化反应，生成具有强荧光的产物；

• 荧光强度与 ROS 水平呈正相关，通过酶标仪检测荧光信号，即可推算 ROS 含量。

3. 核心应用领域

疾病研究：心血管疾病、神经退行性疾病、肿瘤等氧化应激相关疾病机制探究

药物评估：化疗药物诱导的氧化损伤检测、药物毒性筛查

抗氧化剂筛选：植物提取物、小分子化合物的抗氧化活性验证

二、实验方法

阶段 1：细胞准备与处理

1. 细胞接种

◦ 选取对数生长期细胞（如 HeLa、HUVEC），用含 10% 胎牛血清的培养基重悬；

◦ 调整浓度至 1×10⁴-5×10⁴个 /mL，每孔 100μL 接种于 黑色避光 96 孔板（适配荧光检测）。

1. 孵育贴壁

◦ 37℃、5% CO₂培养箱孵育 24 小时，待细胞融合度达 60%-70%。

1. 分组处理

阶段 2：荧光探针孵育与检测

（1）探针选择指南

（2）操作流程（以 DCFH-DA 为例）

阶段 3：数据校正与分析

1. 背景校正：设置 “空白对照孔”（仅培养基 + 探针，无细胞），扣除背景荧光；

2. 细胞数量校正（可选）：ROS 检测后用 MTT 法测细胞活力，将荧光强度归一化为 “荧光强度 / 活细胞数”；

3. 统计分析：

◦ 软件：GraphPad Prism

◦ 方法：t 检验（两组）/ 单因素方差分析（多组）

◦ 输出：均值、标准差、统计图表。

三、实验结果呈现

1. 数据可视化方式

• 柱状图：展示不同处理组的荧光强度对比（如 “H₂O₂浓度 - 荧光强度”）；

• 折线图：呈现处理时间与 ROS 水平的动态变化（如 “孵育 0-24h 荧光强度变化”）；

• 荧光图像（可选）：荧光显微镜拍摄的细胞荧光分布，标注激发 / 发射波长及放大倍数。

2. 结果报告包含内容

1. 原始数据：荧光强度原始值、校正后数据；

2. 统计图表：含误差线、P 值标注（如 * P<0.05，**P<0.01）；

3. 结论解读：明确处理因素对 ROS 水平的调控效应（促进 / 抑制）及剂量 / 时间依赖性。