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实验介绍:
酶联免疫(ELISA),利用抗原与抗体的特异性反应将待测物与酶连接,然后TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。根据颜色反应定量目标抗原或抗体含量。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点
实验流程:
组织/细胞研磨取上清 → 加样→ 温育→ 加抗体→ 温育→ 洗板→ 加酶结合物→ 温育→ 洗板→ 加显色底物→ 终止反应→ 结果测定
送样运输要求:
1)、动植物组织样本(干冰运输)
准确称取动物组织重量按重量(mg):体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水),冰水浴条件下,机械匀浆,制备成10%的匀浆液,2500~3000转/分钟,离心10分钟,取上清液进行测定。
2)、血清样本(干冰运输)
全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜(GLU检测请勿全血样本放置过夜取血清)后于2-8℃ 3000转/分离心15min,取上清即可立即检测;或进行分装,并将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心,然后检测。
3)、血浆样本(干冰运输)
可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min,取上清即可立即检测;或进行分装,并将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心,然后检测。
4)、细胞样本
贴壁细胞:将细胞用PBS冲洗2次后,用细胞刮将细胞小心刮下来,将培养液3000转/分,离心10min。弃上清留细胞沉淀,干冰运输。
悬浮细胞:将培养液3000转/分,离心10min。弃上清留细胞沉淀,干冰运输。
细胞上清:标本于2-8℃,3000转/分离心15min取上清,上清立即用于实验,或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。
实验结果展示: