今天在讲解普鲁氏蓝染色法之前，要先给大家介绍下它的染色对象——含铁血黄素。

      在组织切片中，我们可以通过特殊染色清楚地显示各种各样的有色物质，这些物质被称为色素。色素的种类较多，其性质、来源和意义也各不相同，可以分为人为性色素及沉淀和病理性色素及沉淀物，因此“色素染色”的意义就在于鉴别和确认它们，从而推断病理意义，而我们今天主角含铁血黄素就是一种组织病理学中常见的色素。

      含铁血黄素是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。正常机体内的有些铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式贮存在骨髓中的单核-吞噬细胞胞质内，幼红细胞的线粒体中也有含铁血黄素。当红细胞生命结束或受到破坏时，通常是在淋巴网状系统（如脾脏）由巨噬细胞吞噬降解，红细胞中血红蛋白被吞噬后，在吞噬细胞线粒体的铁小体作用下分解为含铁的“含铁血黄素”和不含铁的“橙色血质”两部分，铁就从血红蛋白中分离出来，大部分被骨髓循环再利用，并以含铁血黄素的形式储藏起来。

      而我们今天介绍的普鲁士蓝染色就是一种将含铁血黄素呈现出来的染色。

普鲁士蓝染色原理

      普鲁士蓝染色（Perls stain）又称含铁血黄素染色，及经过亚铁氰化钾与稀酸反应呈现蓝色；主要针对于三价铁，是一种经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法；染色原理是亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰化钾反应生成一种不溶解的蓝色化合物，称之为普鲁士蓝染色。三价铁的亚铁氰化物是一种稳定的化合物，反应后亦可用其他染色剂进行复染（核固红，伊红等）

普鲁士蓝应用

      普鲁士蓝常用于显示组织内各种出血性病变，常见于吞噬细胞内，可用来观察组织细胞中有无铁元素存在，以及铁元素存在的位置及含量。

在临床检测上的应用有：

① 显示和证明组织内局部出血的各种出血性病变；

② 显示慢性心衰时的肺淤血和心衰细胞（铁阳性巨噬细胞)；

③ 证明和区分含铁血黄素和其他色素沉着，注意正常骨髓和脾脏中常见被染色的三价铁离子。

普鲁士蓝染色实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水；

2、普鲁士蓝染色：染色液等比例混合，切片入染液中染色1h，蒸馏水洗2遍；

3、复染：核固红染色3min，流水冲洗；

4、脱水封片：切片入无水乙醇 3 缸脱水，各 5min，二甲苯透明 5min，中性树胶封片；

5、显微镜镜检，图像采集分析。

注意事项

1、切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用10%中性福尔马林，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。

2、整个操作过程中容器要干净，避免用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。Perls stain 染色时，应根据样本情况调整着色时间。

3、所有切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。

结果判读

铁离子呈蓝色，细胞核红色

送样运输要求

样本放置于10倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输（勿冷冻结冰）；

2. 石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。

实验图例