细胞增殖：衡量细胞生长与活力的核心指标细胞增殖：评估生理状态与外界干预效应的核心窗口

细胞增殖能力是细胞最基本、最重要的生命活动之一，直接反映了细胞的活力、代谢状态以及对外界刺激（如药物、生长因子、基因修饰）的响应。准确评估细胞增殖水平，在基础研究（如细胞周期调控、信号通路）、药物研发（疗效与毒性筛选）、以及肿瘤生物学等领域都具有至关重要的意义。

然而，选择并正确执行一种细胞增殖检测方法并非易事。研究人员常面临以下困惑：

• 该用CCK-8还是MTT？不同方法的原理和适用场景是什么？

• 如何设计时间点和复孔，才能得到有统计学意义的生长曲线？

• 我的实验处理（如药物本身有颜色或还原性）是否会干扰检测结果？

• 如何区分细胞数量的真正增加与细胞体积/代谢的暂时性变化？

皮诺飞生物提供专业、全面的细胞增殖实验服务，我们不仅拥有多种成熟的检测平台，更拥有经验丰富的技术专家，可为您量身定制最佳检测方案，规避常见陷阱，获得真实、可靠的增殖数据。

细胞增值-平板克隆

我们提供的细胞增殖检测方法

针对不同的研究目的、细胞类型和样品特性，我们提供多种经过验证的检测方法：

1. 代谢活性检测法（间接反映增殖）

这类方法通过检测细胞代谢活性来间接反映活细胞数量，适用于高通量筛选。

• CCK-8检测：当前最常用的方法。水溶性四唑盐被细胞线粒体脱氢酶还原生成橙黄色甲臜染料，灵敏度高、毒性低、操作简便。适用于大多数贴壁和悬浮细胞的增殖/毒性检测。

• MTS检测：原理与CCK-8类似，但生成的甲臜染料为水溶性，无需额外溶解步骤。

• MTT检测：经典方法，生成的甲臜结晶需用DMSO溶解。对某些细胞类型可能具有毒性。

2. DNA合成检测法（直接反映增殖）

这类方法直接检测DNA合成，是新细胞产生的直接证据，特异性更高。

• EdU检测：新一代方法。EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）在细胞增殖时掺入DNA，通过与荧光探针（如Alexa Fluor 488）发生高效的点击化学反应进行检测。无需DNA变性，检测快速，灵敏度极高，且兼容多重染色。

• BrdU检测：传统方法。BrdU（溴脱氧尿嘧啶核苷）掺入DNA后，需要通过酸或酶处理使DNA变性，再利用抗BrdU抗体进行免疫检测。步骤较繁琐，但技术非常成熟。

3. 细胞增殖标志物检测法

• Ki-67免疫荧光/免疫组化：检测处于活跃细胞周期（G1, S, G2, M期）的细胞核抗原，适用于组织切片或细胞爬片。

• PCNA检测：检测增殖细胞核抗原，也是反映细胞增殖状态的常用指标。

4. 直接计数法

• 细胞计数仪连续追踪：使用自动细胞计数仪，在多个时间点直接计数活细胞数量，绘制最真实的生长曲线。适用于需要绝对细胞数量的研究。

我们的技术优势：确保您的增殖数据精准可靠

1. 方法学咨询与优化：我们的专家会根据您的实验细胞类型、处理因素特性（如药物是否干扰代谢）、检测通量和预算，为您推荐最合适、干扰最小的检测方法。例如，对于具有强还原性的化合物处理，我们会推荐使用EdU等DNA合成检测法，避免假阳性。

2. 严谨的实验设计：

• 梯度与时间点：协助设计合理的药物浓度梯度和检测时间点，捕捉最佳的效应窗口。

• 对照设置：设立空白对照（无细胞）、阴性对照（未处理细胞）、阳性对照（已知增殖抑制/促进剂），确保实验系统有效。

• 复孔与重复：严格执行技术重复和生物学重复，确保数据的统计效力。

3. 专业的样本处理：对贴壁细胞采用标准化消化流程，确保单细胞悬液质量和活性；对悬浮细胞进行精确计数与铺板。

4. 高质量的仪器检测：使用多功能酶标仪（用于CCK-8/MTS/MTT）和高内涵成像系统或流式细胞仪（用于EdU/BrdU/Ki-67）进行检测，确保数据的精密度和准确度。

5. 全面的数据分析与报告：

• 提供原始吸光度/荧光值数据。

• 计算细胞存活率/增殖率，并绘制剂量效应曲线、生长曲线。

• 计算IC50/EC50等关键药效学参数。

• 提供专业的图表和结果描述。

服务流程

1. 需求沟通：明确实验目的、细胞种类、处理因素及预期产出。

2. 方案制定与确认：推荐检测方法，确定实验设计（浓度、时间点、复孔数），提供报价和周期。

3. 细胞准备与处理：进行细胞复苏、扩增，按方案进行药物处理或基因操作。

4. 检测执行：在指定时间点，使用选定方法进行增殖检测。

5. 数据分析与报告交付：分析数据，形成完整报告。标准周期约为收到细胞或完成处理后1-2周。

典型应用场景

• 药物筛选与药效评价：评估抗癌药、生长因子、中药单体等对细胞增殖的抑制或促进作用。

• 基因功能研究：过表达或敲低特定基因后，观察对细胞生长的影响。

• 细胞毒性实验：评估材料、化学品、辐射的细胞毒性。

• 培养条件优化：比较不同血清、培养基、添加物对细胞生长的影响。

• 肿瘤生物学研究：研究癌基因、抑癌基因对肿瘤细胞增殖的调控。

常见问题解答

Q：CCK-8和EdU检测，我该选哪个？
A：CCK-8操作更简便、成本较低、适合高通量，反映的是代谢活性。EdU检测更直接（针对DNA合成）、灵敏度更高、可进行细胞定位和共染色，但成本和操作复杂度稍高。若您的处理可能影响细胞代谢，或需要观察增殖细胞的亚定位，推荐EdU。

Q：检测时需要铺多少细胞？
A：这取决于细胞类型、增殖速度、检测时间点和板孔规格。我们会根据预实验或经验确定最佳铺板密度，通常在96孔板中每孔铺1,000-10,000个细胞，以确保检测时细胞处于对数生长期且未过度融合。

Q：可以检测3D培养（如细胞球）的增殖吗？
A：可以。但对于3D模型，CCK-8等试剂渗透可能不均。我们推荐使用基于ATP检测的方法（如CellTiter-Glo® 3D），或对球体进行消化成单细胞后再用流式检测EdU，以获得更准确的结果。

Q：除了提供数据，你们能帮忙解读结果吗？
A：当然。我们交付的报告会包含基本的数据解读，说明处理组相对于对照组的变化趋势及显著性。您也可以随时与我们的技术专家讨论结果的生物学意义和后续实验方向。

细胞增殖检测是众多研究的基石。一个精心设计、准确执行的增殖实验，能为您的课题提供最有力的初始证据。

如果您正在为选择增殖检测方法、设计实验或分析数据而困扰，皮诺飞生物专业的细胞增殖实验服务团队，随时准备为您提供从方案到报告的一站式解决方案。

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