实验介绍 :
哺乳动物线粒体 DNA (Mitochondrial DNA,mtDNA)是一全长为 16.5kb左右的双链闭环分子。与核不同的是,线粒体基因组为多拷贝基因组。mtDNA 功能的完成既依赖于每一个mtDNA分子结构的完整性,也同时依赖于细胞中 mtDNA 的拷贝数。许多研究表明,癌症、神经退行性疾病、心血管疾病、糖尿病等疾病的发生发展与mtDNA大片段、全基因组的缺失及拷贝数变化密切相关。
实验流程:
以经过处理的细胞为模板,扩增出mtDNA的目的基因,纯化回收,制备标准品。使用mtDNA目的基因引物和核基因对照引物对检测样本进行扩增,结合标准品进行mtDNA拷贝数的定量检测和分析,并绘制标准曲线。
结果展示:
送样运输要求:
1)动物组织:100 mg(黄豆大小),最少50 mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加,干冰运输。
2)细胞:1×10个细胞。细胞沉淀或加入trizol的细胞样本(不要直接运输加trizol的细胞培养皿),干冰运输。
3)全血:最少1mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20°℃运输。
4)植物:新鲜的叶、果肉、种子等最少需100mg,干冰运输。
5基因组DNA,干冰运输。
RNA/DNA提取
实验介绍 :
Trizol法即异硫氰酸胍-苯酚法,是最为常见也是最经典的提取方法。
强变性剂异硫氰酸胍首先使细胞裂解,并使核蛋白复合体中的蛋白变性。
在特定pH条件下,由于DNA和RNA的溶解度不同而被分离,DNA位于中间相,RNA位于水相,再有机溶剂来沉淀RNA即可得到纯度较高的RNA。
结果展示:
( RNA检测)
(DNA标准品:1mg/ml)
实验中通常用OD260/280来检测RNA纯度,同时将OD260/230作为参考值,不同比值所代表的意义
送样运输要求:
1)动物组织:100 mg(黄豆大小),最少50 mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加,干冰运输。
2)细胞:1×10个细胞。细胞沉淀或加入trizol的细胞样本(不要直接运输加trizol的细胞培养皿),干冰运输。
3)全血:最少1mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20°℃运输。
4)植物:新鲜的叶、果肉、种子等最少需100mg,干冰运输。
5)cDNA和基因组DNA,干冰运输。