规格：50µL
货号：PN0115
价格：600元/50µL
| 产品描述 | BODIPY493/503 methyl bromide 是一种 BODIPY 染料。BODIPY 染料是一种具有强紫外吸收能力的小分子染料，其荧光峰比较尖锐，量子产率高。其对环境的极性和 pH 值相对不敏感，因此，在不同生理条件下相对稳定。由于其结构的非对称性，BODIPY 具有多种衍生结构产物。BODIPY 脂滴类染料可以很好的穿过细胞膜进入细胞内部，通过在细胞内的中性脂类上定位以进行特异性染色，因此，该染料可用于标记活细胞和固定细胞。最大激发/发射波长：493/503 nm。 |
| 本产品提供的BODIPY 493/503（2500×）为5 mM储存液，适用于大多数细胞，为了得到更为满意的结果，可以适度调节染料浓度，BODIPY 493/503的终浓度一般为1-10 μM，最优先的推荐终浓度为 2μM。 | |
| 储存与运输 | 冰袋运输，-20℃保存，有效期6个月 |
| 使用方法 | ⼯作液的配制 ： |
| ⽤预热好的⽆⾎清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-10 μM 的 BODIPY493/503 methyl bromide ⼯作液，即稀释2500倍，则工作液浓度为2μM。 | |
| 注：请根据实际情况调整 BODIPY493/503 methyl bromide ⼯作液浓度，且现⽤现配。 | |
| 实验步骤 | 细胞染⾊（悬浮细胞）： |
| 1.将固定好的或者新鲜的细胞悬液，经离⼼收集细胞，加⼊ PBS 洗涤两次，每次 5 min。细胞密度在 1×106/mL； | |
| 2.取一张洁净的载玻片，组化笔画圈圈住组织，晾干，往圈内加入50-100µl的细胞悬液，制成细胞滴片，用枪头混匀细胞，自然风干； | |
| 3.取制做好的滴片，入纯水洗涤2次，每次1min; | |
| 4.用PBST润洗玻片5-10s,稍刷干； | |
| 5.加⼊ 100µl的 BODIPY493/503 methyl bromide ⼯作液，室温孵育 5-30 min； | |
| 6.吸去染料工作液，用PBS润洗3次，每次5 min； | |
| 7.加入200µl的Dapi染液，室温染色2min，用纯水洗涤3次，每次2min； | |
| 8.用抗荧光淬灭封片剂封片，避光盒保存； | |
| 9.使⽤荧光显微镜或共聚焦显微镜进⾏观察。 | |
| 细胞染⾊（贴壁细胞） | |
| 1.将贴壁细胞培养于⽆菌盖玻⽚上； | |
| 2.从培养基中移出盖玻⽚，吸除多余培养基； | |
| 3.新鲜细胞则加⼊ 100 μL 染料⼯作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育 5-30 min；或者加入通用型组织固定液室温固定15min,吸弃固定液，用PBS润洗孔板2-3次，每次5min，吸弃PBS后，加入100µlμL 染料⼯作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育 5-30 min； | |
| 4.吸去染料⼯作液，⽤培养基或者PBS洗 2-3 次，每次 5 min； | |
| 5.加入200µl的Dapi染液，室温染色2min，用纯水洗涤3次，每次2min； | |
| 6.用抗荧光淬灭封片剂封片，避光盒保存； | |
| 7.使⽤荧光显微镜或共聚焦显微镜进⾏观察。 | |
| 组织染⾊（冰冻切片） | |
| 1.若为新鲜组织，使用OCT进行包埋切片；若为固定组织，先用蔗糖进行脱水处理，再用OCT进行包埋切片，切片厚度8µm ； | |
| 2.自然风干切片； | |
| 3.组化笔画圈圈住组织，滴加100 μL 染料⼯作液覆盖切片，室温染色5-30min； | |
| 4.PBS洗去染料⼯作液，每次 5 min； | |
| 5.加入200µl的Dapi染液，室温染色2min，用纯水洗涤3次，每次2min； | |
| 6.用抗荧光淬灭封片剂封片，避光盒保存； | |
| 7.使⽤荧光显微镜或共聚焦显微镜进⾏观察。 | |
| 注意事项 | 1.请根据实际情况调整 BODIPY493/503 methyl bromide ⼯作液浓度与孵育时间。 |
| 2.实验建议进⾏阳性对照，将对照组细胞与 30 μM 油酸孵育 8 h 后进⾏后续实验。 | |
| 3.本产品仅限于专业⼈员的科学研究⽤，不得⽤于临床诊断或治疗，不得⽤于⻝品或药品。 | |
| 4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴⼀次性⼿套操作。 |
