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动物模型-溃疡性结肠炎

一.疾病背景：

  溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC） 是一种病因不明，波及结肠与直肠的慢性、特发性炎性肠病。据世界胃肠病学组织描述，UC在30～70岁人群中发病率基本稳定，性别间发病率也基本持平。但从整体人群而言，该病在世界范围内发病率正在不断上升，在我国等新兴工业化国家和地区这一表现更为显著。所以，需要构建合适的动物模型进行疾病的机制研究。

二.动物造模原理：

  葡聚糖硫酸钠盐（Dextran Sulfate Sodium Salt, DSS）是一种聚阴离子衍生物，DSS常被用于诱导结肠炎模型，其诱导机制虽尚未明确。目前的研究主要认为DSS增加肠道通透性、破坏肠黏膜屏障、上调某些细胞因子（肿瘤坏死因子、白介素、干扰素、IL-10和IL-12）、激活某些通路（NF-κB通路和TRPV1通路）或肠道菌群失调等有关。根据给药时间、以及给药周期可分为急性和慢性两种结肠炎模型。

  对比多种UC建模类型，DSS造模具有很大优势:

1、症状与人类UC高度相似：可用于研究结肠炎发生机制和药效研究;

2、成模率高：自由饮用DSS水溶液，简单易行、重复性强;

3、可构建多种结肠炎模型：急性结肠炎、慢性结肠炎，还可以联合AOM构建结肠炎相关性癌症（CAC）模型;

4、适用于多种属动物造模：小鼠、大鼠、斑马鱼、猪、果蝇等;

5、安全性高：DSS可被自然生态系统降解，对环境安全。

三.实验材料与方法

 1.实验动物

     SPF 级 C57BL/6J 6-8 周 龄 雄/雌 性 小 鼠 ，体重为 (29.65±5.35)g。

 2.造模方法

    ①慢性结肠炎造模：给予小鼠1%~3% DSS自由饮用数个星期即可。

②慢性结肠炎造模：急性造模一般采用较高浓度的DSS建立，给药时间较短。如给予仓鼠3%~5% DSS自由饮用一周即可。

 3.急性DSS结肠炎模型具体过程：Day1：称重并标记各组C57BL/6小鼠。待造模小鼠饮用3-5% DSS水溶液，未处 理组小鼠饮用正常水。

Day3：给予待造模小鼠更换新鲜3-5%DSS饮用水。

Day5：给予待造模小鼠更换新鲜3-5%DSS饮用水。

Day8：给予待造模小鼠更换新鲜不含DSS的饮用水。

数据记录：每隔24h记录小鼠体重、粪便粘稠度、粪便潜血等指标。

四．实验结果：

1.组织学评估

组织学分析的标准方法为HE染色，待测样本经4%多聚甲醛固定，固定状态良好后，严格按照本单位病理实验检测SOP程序进行修剪、脱水、包埋、切片、染色、封片,最后镜检合格的样片进行扫描拍照。

动物个体主要变化：腹泻、黏液样便、粪便潜血、肉眼血便、重量减轻、活动度减少，毛色变差等。

HE染色的主要病理变化：

急性结肠炎模型表现：黏膜水肿、杯状细胞缺失、隐窝肿胀破坏，上皮细胞损伤，黏膜和黏膜下层出现不同程度的炎症细胞浸润。

慢性结肠炎模型表现：黏膜增厚、淋巴结肿大，杯状细胞缺失、隐窝缺失，甚至出现肿瘤样变。

结肠组织免疫荧光染色

 结肠组织CD4染色

 结肠组织MUC2染色

结肠组织ZO-1染色

结肠组织免疫组化染色

结肠组织TNF-α染色

结肠组织IL-6染色

统计分析

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