规格：50T
货号：P019301
价格：50T/4200元
保存温度：储存在-20℃,有效期12个月
| 试剂名称 | 规格-50T/100T | 储存条件 | 备注 |
|---|---|---|---|
| 修复液（20*） | 100ml/200ml | 2-8℃ | 请按说明书进行稀释后使用 |
| 3%过氧化氢 | 6ml/12ml | 2-8℃ | 即用型 |
| 血清封闭液 | 6ml/12ml | 2-8℃ | 即用型 |
| HRP 标记抗兔/鼠IgG通用型二抗 | 8ml/16ml | 2-8℃ | 即用型 |
| TYR-430 | 5ml/10ml | 2-8℃ | 即用型 |
| TYR-488 | 5ml/10ml | 2-8℃ | 即用型 |
| TYR-555 | 5ml/10ml | 2-8℃ | 即用型 |
| TYR-651 | 5ml/10ml | 2-8℃ | 即用型 |
| 封片剂（含DAPI） | 5ml | -20℃ | 即用型 |
酪酰胺信号放大技术（TSA）是一种基于辣根过氧化酶（HRP）的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应（已标记荧光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点）产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合，从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。
本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种:TYR-488 Plus，TYR-555(CY3) Plus，TYR-651/647(CY5) Plus，TYR-680 Plus，TYR-594 Plus，TYR-430 Plus,TYR-750 Plus。此试剂盒的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，极大丰富了此试剂盒的内容。
冰袋运输；本试剂盒储存在-20℃，有效期12个月。
自备：二甲苯，酒精，固定液，吐温20，PBS，PBST，一抗，一抗稀释液。
PBS：购买或者自行配制0.01mol的PBS缓冲液；
PBST：取上述配制好的PBS缓冲液，每1L加入1ml吐温20，混匀后即可使用，现配现用；
1*修复液配制：用纯水稀释20倍后使用，例如：精准量取纯水190ml，加入修复液（20*）10ml，混匀后即可使用；
备注：开始实验前请仔细阅读该说明。
1.脱蜡（石蜡切片）
将切片依次浸泡于二甲苯1（15min）、二甲苯2（15min）、无水乙醇1（5min）、无水乙醇2（5min）、95%乙醇（5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min），最后用水漂洗片子。
2.固定（冰切）
切片稍晾干 ，用通用组织固定液固定15min，取出切片后纯水洗5min。
3.抗原修复（3.1和3.2修复方式选择其中一种即可）
3.1热修复仪修复(适用于常规组织)：将切片置于染色架上，入盛装适量的修复液的修复仪内（确保切片完全浸没，防止干片），100℃维持修复15min以上；如遇例如骨组织、脑组织等易掉片组织，则采用水浴温度80-85℃条件下，维持修复10min，自然冷却后用PBS（PH=7.4）浸洗3次，每次2min。
3.2免疫染色抗体洗脱液处理（本试剂盒未提供，需另行购买）：切片稍甩干后将恢复至室温的抗体洗脱液铺满整个组织，室温孵育5 min后去除抗体洗脱液，再次滴加足量的抗体洗脱液完全覆盖组织，37°C孵育30 min，孵育完成后将玻片置于PBS内浸泡洗涤3次，每次2 min。
提示:请根据实际组织摸索合适的修复方式。
4.内源性酶阻断（可选）
组化笔画圈圈住组织，PBST稍润洗组织3-5s,将3%过氧化氢溶液滴加在切片上，一片组织约50ul染液，于室温孵育20min,PBS洗涤切片3次，每次2min。
5.血清封闭
PBST稍润洗组织3-5s，甩干切片，每张切片滴加50-100ul血清，37℃孵育30min。
6.孵育第一支一抗
使用PBS或者血清按照一定浓度稀释一抗（参考抗体官网），4℃过夜孵育或者37℃孵育2h
7.二抗孵育（使用与一抗同来源标记的二抗：本试剂盒内提供的是鼠兔通用型二抗，如遇其他特殊种类，需另行购买）
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，每张切片滴加HRP 标记抗兔/鼠IgG通用型二抗约50ul，室温孵育30min。
8.孵育TSA试剂
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，滴加TYR-430试剂，室温孵育5-15min.再用PBS洗涤3次，每次5min。
9.抗原修复
重复步骤3，根据组织状态，选择一种合适的修复方式。
10.孵育第二支一抗
使用PBS或者血清按照一定浓度稀释一抗（参考抗体官网），4℃过夜孵育或者37℃孵育2h。
11.二抗孵育（使用与一抗同来源标记的二抗：本试剂盒内提供的是鼠兔通用型二抗，如遇其他特殊种类，需另行购买）
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，每张切片滴加HRP 标记抗兔/鼠IgG通用型二抗约50ul，室温孵育30min。
12.孵育TSA试剂
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，滴加TYR-647试剂，室温孵育5-15min.再用PBS洗涤3次，每次5min。
13.抗原修复
重复步骤3，根据组织状态，选择一种合适的修复方式。
14.孵育第三支一抗
使用PBS或者血清按照一定浓度稀释一抗（参考抗体官网），4℃过夜孵育或者37℃孵育2h。
15.二抗孵育（使用与一抗同来源标记的二抗：本试剂盒内提供的是鼠兔通用型二抗，如遇其他特殊种类，需另行购买）
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，每张切片滴加HRP 标记抗兔/鼠IgG通用型二抗约50ul，室温孵育30min。
16.孵育TSA试剂
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，滴加TYR-488试剂，室温孵育5-15min.再用PBS洗涤3次，每次5min。
17.抗原修复
重复步骤3，根据组织状态，选择一种合适的修复方式。
18.孵育第四支一抗
使用PBS或者血清按照一定浓度稀释一抗（参考抗体官网），4℃过夜孵育或者37℃孵育2h。
19.二抗孵育（使用与一抗同来源标记的二抗）
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，每张切片滴加HRP 标记抗兔/鼠IgG通用型二抗约50ul，室温孵育30min。
20.孵育TSA试剂
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，滴加TYR-555试剂，室温孵育5-15min.再用PBS洗涤3次，每次5min。
21.抗原修复
重复步骤3，根据组织状态，选择一种合适的修复方式。
22.二抗孵育（使用与一抗同来源标记的二抗）
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，每张切片滴加HRP 标记抗兔/鼠IgG通用型二抗约50ul，室温孵育30min。
23.孵育TSA试剂
| 荧光素名称 | 最大激发波长(nm） | 最大发射波长(nm） | 建议图片颜色 |
|---|---|---|---|
| TYR-350 | 345 | 442 | 蓝色 |
| TYR-430 | 434 | 480 | 青色 |
| TYR-488 | 490 | 520 | 绿色 |
| TYR-555 | 550 | 570 | 红色 |
| TYR-651 | 640 | 670 | 粉色 |
PBS润洗切片3次，每次2min，PBST润洗切片3-5S,甩掉多余液体，滴加TYR-555试剂，室温孵育5-15min，再用PBS洗涤3次，每次5min。
24. DAPI 染核封片
在组织上滴加抗荧光封片剂（含DAPI），盖上盖玻片。将做好的荧光片子于4℃避光保存。
通过多重TSA荧光标记，可在同一张组织切片上实现四种靶标蛋白同时显色，搭配DAPI核染完成五色荧光成像，不同TYR荧光基团对应不同发射波长，可通过荧光显微镜区分各蛋白表达位置与表达量。
1.抗原修复时间和条件要依组织来调整，修复过度，组织易脱片。
2.孵育后的每一步均必须清洗干净，避免出现杂点影响表达的观察。
3.一抗的稀释比参考官网调整，浓度高了容易造成高背景，影响观察；浓度低了易产生阴性结果。
4.孵育温度保持稳定，切片水平且孵育均匀，否则易产生结果不均匀的现象。
5.修复完后一定要自然冷却，否则易造成组织干片，表达背景高且表达不均匀。
6.微量的产品使用移液枪时请尽量精准，离心之后使用。
本产品仅供科研使用，不用于临床诊断! (产品包装升级中，请以实物为准)
皮诺飞生物科技 PNF
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